微生物实验室培训计划

Ⅰ cnas实验室人员能力监控从哪些方面开展

你好

1微生物领域

4.1.5 g）实验室应设置生物安全责任人和生物安全监督员，负责生物安全。

4.1.5 h) 实验室技术管理者中应至少包括一名在申请认可或已获认可的微生物检测范围内具有微生物专业或与微生物密切相关的本科以上学历和三年以上微生物检测的工作经历的成员；负责指导或培训检验人员常规微生物实验；5.2.1 a）实验室选用检测人员时，应考虑有颜色视觉障碍的人员不能执行某些涉及到

辨色的试验。

5.2.1 b）实验室从事微生物检测的关键检测人员应至少具有微生物或相关专业专科以上的学历，或者具有 10 年以上微生物检测工作经历。授权签字人应具有相关专业本科以上学历，并具有 3 年以上相关技术工作经历，如果不具备上述条件，应具有相关专业专科以上的学历和至少 10 年的微生物相关领域检测工作经历。

5.2.1 c）实验室可通过内部质量控制、能力验证或使用实验室间比对等方式评估检测人员的能力和确认其资格。新上岗人员以及间隔一定时间重新上岗的人员需要重新评估。

5.2.1 d）如实验室使用的高压蒸汽灭菌器不属于简单压力容器（定义参见 TSG R0003-2007《简单压力容器安全技术监察规程》）时，操作人员需持有特种作业人员证书。

5.2.1 e）实验室人员应熟悉生物检测安全操作知识和消毒灭菌知识。

5.2.2 实验室应制定人员培训和继续教育计划，包括常规微生物检测、无菌操作、生物防护、生物安全柜维护等方面知识的专门培训，掌握相关的知识和专业技能。

5.2.4 适用时，食品生产区抽样人员应独立于实验室的微生物检测活动，以防止交叉污染。

5.2.5 当检测人员或授权签字人职责变更或离开岗位 6 个月以上再上岗，应重新考核确认。

Ⅱ 什么是微生物培养技术

“微生物的利用”包括“进行微生物的分离和培养”、“测定某种微生物的数量”、“研究培养基对微生物的选择作用”和“尝试利用微生物进行发酵来生产特定的产物”四项具体内容标准，按照相关内容标准的要求，结合人教版教材所对应的实验课题，本文将谈谈对本专题的教学组织。

1 习得微生物培养的基础知识和基本技能

本专题涉及三个实验课题，它们的关系及学习要求如下图所示。在下图中，课题1涉及微生物培养的基础知识和基本的操作技能，是其他两个课题的基础，课题2和课题3涉及特定的微生物的分离、计数和鉴定，难度较大，课题2强调选择性培养基的配制和作用，课题3是在选择性培养基的基础上，又相应地增加了鉴别性培养基的知识及其应用。

1.1 配制微生物培养基 配制培养基的基础知识是培养、观察和研究微生物的基础。教学时，可以先展示有菌落生长的培养基平板，给学生以视觉刺激，让他们体会到要观察和研究微生物，必须创设一定的条件让微生物大量快速地繁殖起来，只有形成具有一定特征的菌落，才能更好地研究微生物。进而向学生提供几种微生物培养基的配方，让学生通过比较分析各种配养基配方，明确微生物培养基的基本成分包括：碳源、氮源、无机盐和水，有些微生物还需要某些特殊的生长因子。然后，依次阐明固体、半固体和液体培养基的用途和配制方法，并结合下面的流程图概述培养基配制的操作步骤：

组织学生配制微生物培养基时，要向他们讲清下列注意事项：（1）溶化琼脂时要控制火力的大小并不断搅拌，以免培养基溢出或烧焦；（2）加热过程中部分水分蒸发，待琼脂完全溶化后应补加蒸馏水，以保持溶液的浓度；（3）分装至试管时培养基的高度不要超过试管高度的1/5；（4）一般是培养基先灭菌再倒平板，也可先倒平板,课间再灭菌；（5）冷却后的平板要倒置，以确保拿放方便，同时避免水分蒸发，以利微生物生长。

1.2 无菌技术操作无菌技术是培养、分离和纯化微生物的重要技术手段，也是植物组织培养的关键性操作。教学时，要先让学生正确区分消毒和灭菌这两个概念，并充分认识无菌操作的重要性；然后，在教师的组织和指导下进行规范、熟练地操作，以便顺利完成微生物的培养、分离和纯化等实验。下表是消毒和灭菌的一些常用方法及使用范围。

定义
常用方法
微生物培养和组培的应用

消毒
使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分菌体,但不伤及活组织
煮沸
玻璃仪器

紫外线
实验室、操作台、衣物等

酒精溶液
手、外植体等

次氯酸钠溶液等
外植体

灭菌
使用强烈的理化因素杀死物体内外所有菌体、芽孢和孢子
高压蒸汽
培养基、玻璃仪器、棉塞、牛皮纸等

灼烧
接种环、涂布器等

干热
玻璃仪器

1.2.1 接种的方法及作用 微生物接种方法有两种，一是划线接种，即用接种环划线将菌体沾在斜面培养基或平板培养基上。微生物的生长和繁殖迅速，一段时间后，就会在培养基表面形成长满菌落的细线。划线法的作用是纯化微生物，通过划线将微生物单个地分离，并最终形成标准的菌落；二是涂布接种，即用涂布器将稀释菌液均匀地涂布在平板上。一个菌体在培养基平板上形成一个菌落，通过统计菌落数可以计算样品中的菌体数目。

1.2.2 规范实验操作 接种过程的无菌操作是微生物实验的关键环节，右图为划线接种的操作示意图，下表列出划线接种的基本步骤和说明。教学中，要求学生认真领会无菌接种的技术原理，反复练习操步骤作。通过练习达到熟练程度，并培养严谨认真的科学精神和一丝不苟的实验态度。

序列
操作步骤
分析说明

1
将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红
将接种环灭菌，避免污染菌种

2
在火焰旁冷却接种环，拔除盛有菌液的试管棉塞
避免杂菌污染菌种

3
将试管口通过火焰
灼烧灭菌，防止试管口菌体污染培养基

4
将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取菌液
冷却接种环可避免杀死菌种

5
将试管口通过火焰，并塞上棉塞
避免试管口杂菌污染菌种

6
左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基
初步接种。划破培养基不利于后续的继续划线，长出的菌落不标准

7
灼烧接种环，冷却后从第一区划线的末端向第二区划线。重复以上操作，在第三、四、五区划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连
从上个区域的末端向下个区域划线,可逐步分离出单个菌体，从而实现微生物的纯化

8
将平板倒置，放入培养箱中培养
倒置平板防止水分蒸发，也方便拿放

1.3 稀释菌液的意义和操作方法 在单位体积的菌体培养液内，含有的微生物个体数目很多。要对微生物进行分离和计数必须将菌液稀释，只有在稀释度足够高的菌液里，聚集的微生物才能分散成单个细胞。一般将菌液稀释到10-3～10-7时，接种后可能在培养基平板上形成30～300个左右的菌落，统计的菌落数也比较准确可信。

用移液管和无菌水稀释微生物菌液是一件要求较高的操作技术，学生需要经过多次练习才能做到尽量地减少误差。 以土壤为样品进行稀释操作的注意事项是：（1）初次称量的土壤样品，稀释后的菌液浓度较大，移液时极容易堵塞移液管或吸入较多的土壤颗粒，应静置一段时间后再移液，或者用低速离心机离心1分钟后进行移液；（2）当稀释倍数大时，在稀释前一定要震荡试管，充分混合菌液，保证移液操作的准确性；（3）每次移液前一定要注意用无菌水（或蒸馏水）清洗移液管并用气球吹干，以保证移走菌液的浓度与试管中的一致。

2.实验设计能力的训练

2.1 选择性培养基的实验设计 根据功能的不同，培养基分为选择性

培养基和鉴别性培养基，在“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”的实验中，先让学生通过分析和判断下面的三个培养基配方，真正理解选择性培养基的含义。然后，启发学生设计一组用于分离尿素细菌的探究实验，帮助学生理解选择性培养基的特性及作用。

组别
培养基类型
是否涂布接种
目的

实验组
以尿素为唯一氮源的培养基
是
分离尿素细菌

对照组
牛肉膏、蛋白胨培养基
是
判断该培养基有无选择性

2.2 鉴别性培养基的实验设计 在“分解纤维素的微生物的分离”实验中，要鉴别筛选出来的微生物是不是分解纤维素的微生物，就必须用鉴别性培养基。刚果红与纤维素等多糖类物质反应形成红色复合物，添加刚果红的培养基呈红色，接种的微生物若能够分解纤维素，就会在其菌落的周围形成透明圈。值得注意的，培养基的琼脂中含有淀粉类物质，产生淀粉酶的微生物在培养基上也会形成透明圈；也有些微生物具有降解刚果红的能力，培养时间过长，也会在菌落周围出现透明圈。与分解纤维素形成的透明圈相比，这两种透明圈小而模糊，因此，本实验最好先用选择性培养基筛选分解纤维素的微生物，再配制鉴别性培养基进行“分解纤维素的微生物的分离”的实验。

3 教学实施的前期准备

3.1提前准备好实验仪器、设备和药品 为方便大家提前做好准备，现以人教版教材为例，将本专题所需要的仪器、设备和药品列表如下：

课题名称
实验仪器和设备
实验试剂或药品
说明

微生物的实验室培养
培养皿、试管、锥形瓶、量筒、酒精灯、电子天秤、高压蒸汽灭菌锅、移液管、接种环、涂布器、恒温箱、干热灭菌箱、小铁铲等

牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、盐酸、氢氧化钠、琼脂等
干热灭菌箱能够迅速地将洗干净的培养皿和试管烘干，小铁铲用于铲土

土壤中分解尿素的细菌的分离与计数
除配制牛肉膏蛋白胨培养基所需物质外，增加KH2PO4 、NaHPO4、MgSO4·7H2O、葡萄糖、尿素、酚红等

分解纤维素的微生物的分离
除配制牛肉膏蛋白胨培养基所需物质外，增加纤维素、NaNO3、Na2HPO4·7H2O、KH2PO4、KCl、酵母膏、水解酪素、CMC-Na(羧甲基纤维素钠)、土豆汁、刚果红等

3.2 做好课时安排及计划 以下为本专题的三个课题的课题数及其说明。

课题名称
课时数
说明

微生物的实验室培养
4
配养基的基本知识及配制方法1；配制培养基及倒平板1；纯化大肠杆菌和涂布接种1，观察分析1

分离土壤中分解尿素的细菌
3
基本原理及实验设计1；样品稀释及涂布接种1；对菌落进行统计及实验的分析与讨论1；在第二和第三课时之间需要间隔2天时间

分解纤维素的微生物的分离
3
基本原理及实验设计1；样品稀释及涂布接种1；对菌落进行统计及实验的分析与讨论1；在第二和第三课时之间需要间隔2天时间

3.3 安排好教学班的实验顺序 微生物实验涉及较多的实验仪器，而且实验时需要课内和课外相结合，如实验室培养需要学生在课堂上完成两项重要的操作步骤，一是配制培养基并倒平板；二是接种操作。平板灭菌工作由于需要较长的时间，因此只能由教师在课间完成。为保证每位学生都能亲手操作，保证各个教学班能在有限时间内完成实验任务，教师可采取如下的教学流程和教学安排。

3.4 做好课后的观察与记录 配制培养基和接种操作可以在课堂上完成，但接种后的平板放入培养箱中需要培养2～3天，这期间可安排生物科代表或部分小组长进行定期观察，并做好计录，以便及时让其他学生观察到自己的实验成果。特别需要说明的是，如果学生不能及时观察，培养的时间过长，很多菌落就会联成一片，计数时就无法做到准确有效。

4.实验中需要注意的安全操作

微生物本身就是危险生物，实验操作中又涉及到消毒、灭菌和接种等基本环节，因此要对学生进行安全教育，确保学生的安全和实验的顺利进行。一是操作安全，接种时要注意避免手被酒精灯火焰灼伤，接种后要及时提配学生洗手，以防止被微生物感染；二是环境安全，使用后的培养基丢弃前一定要进行灭菌处理，以免污染环境。

Ⅲ 实验室微生物检验需要注意哪些问题

微生物检验无菌操作的注意事项有很多细节，日常的微生物检验过程中要注意无菌操作，除了要在洁净台和操作器皿上的消毒，还需要注意人员卫生和环境的卫生。

【操作技巧】

进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒或取备品更换。为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央。工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用前，不要过早开瓶;用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口直立可增加落菌机会。吸取营养液、PBS、细胞悬液及其它各种用液时，均应分别使用吸管，不能混用，以防扩大污染或导致细胞交叉污染。工作中不能面向操作野讲话或咳嗽，以免唾沫把细菌或支原体带入工作台面发生污染。操作前用酒精擦拭超净台面及双手。手或相对较脏的物品不能经过开放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液时如吸管尖碰到瓶口，则应将吸管丢掉。

【培养前准备】

在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实验要求，准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。这可以避免开始实验后.囚物品不全往返拿取而增加污染机会。

【火焰消毒】

在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时，首先要点燃酒精灯或煤气灯。以后一切操作，如按装吸管帽、打开或封闭瓶口等，都需在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意：金属器械不能在为焰中烧的时间过长，以防退火，烧过的金属镊要待冷却后才能挟取组织，以免造成组织损伤。吸取过营养液后的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管头中营养液能烧焦形成炭膜，再用时会把有害物带入营养液中。开启、关闭长有细胞的培养瓶时，火焰灭菌时间要短。防止因温度过高烧死细胞。另外胶塞过火焰时也不能时间长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养细胞。

【洗手和着装】

原则上和外科手术相同。平时仅做观察不做培养操作时，可穿装细胞培养室内紫外线照射30min的清洁工作服。在利用超净台工作时，因整个前臂要伸入箱内，应着长袖的清洁工作服，并于开始操作前要用75%酒精消毒手。如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手。进入原代培养室需彻底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。

【操作台消毒】

体外培养细胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。即便使用设备完善的实验室。若实验者粗心大意，技术操作不规范,也会导致污染。因而.为在一切操作中为最大可能的保证无菌.每一项工作都必须做到有条不紊和完全靠。无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次(拖布要专用).紫外线照射消毒30-50min，超净工作台台面每次实验前要用75%酒精擦洗。然后紫外线淌毒30min。在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线，消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置.否则会遮挡射线降低消毒效果。—些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。

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Ⅳ 生物实验室怎么规划设计

二、微生物实验室平面布局

微生物实验室应设置成独立的区域，与其他实验室分开，门口设有门禁，非相关人员不得进入，各室根据工作内容合理布局，既方便工作又不互相影响。入口处设置集中式更间，培养室根据培养条件和种类不同可设置多间(如霉菌培养室、细菌培养室、固体培养室、液体培养室等)。

(1)洁净实验室：自成一区，安排在实验室的靠边角落处，用密封门限制人员的进出，把有洁净要求的房间设置在人员干扰较少的地方，把辅助房间设置在外部。考虑微生物实验操作流程，方便人流与物流的份额里。为控制人员的出入(人流)，只设有一个密封门进入微生物实验室主洁净区，操作人员进入走廊然后进入准备间，并从准备间分别经过一更、二更、缓冲进入操作区。物流则由传递窗实现。排风口装有高效过滤器，送风口装有高效过滤静压箱，室内送排风曹勇上送下排方式，室内排风单侧布置，不得有障碍。余压阀自动调节室内压力，保持正压洁净状态。

(2)洗涤室：洗涤室房间的尺寸根据日常工作量决定，一般不小于一个单间，洗涤室的位置靠近培养室，给排水设施完善，洗涤台面须耐热耐酸，室内配器皿柜，滴水架，干燥架，边台等，地面应有良好的排水坡度和地漏。

(3)准备室：设实验台、试剂柜等要绝缘、耐热、实验台要耐水耐腐蚀：设置上下水装置，涉及粉末，筛分等操作，需配置相应的设备。局部排风，设排风柜。

(4)培养室：主要配置各种培养箱、摇床，要求温度较恒定，有足够的 电力供应。
如果您想要比较专业的话，可以与实验室专业的公司进行面对面交谈，我知道之前有家叫森拉 普尔的公司，他们好像实验室方面比较专业的。

Ⅳ 长期在微生物实验室工作对身体有害吗

长期在微生物实验室工作对身体有害。

Ⅵ 申请CMA资质需要准备那些资料

CMA资质认证全套来资料档自案总目录
1.机构管理档案（人员一览表、营业执照、公正性执行情况检查记录表）
2.设备管理档案
3.设备档案
4.人员档案
5.培训档案（培训需求申请表、实验室人员培训计划表、内部培训考勤表、考核试题、人员培训效果评价表、人员培训记录表）
6.体系文件（质量手册、程序文件、作业指导书、质量和技术表格）
7.现行标准
8.物资管理档案（试剂领用记录、微生物试剂领用记录、标准物质台账、试剂台账、试剂验收、标准品出入库台账、标准物质领用记录）
9.易制毒化学品档案、易制爆化学品档案
10.废液处理档案
11.方法管理档案
12.质控档案
13.检测人员上岗考核（人员操作考核记录表）
14.检验检测项目一览表及检验能力分析表
15.水和试剂的符合性检查
16、样品管理档案及检测报告管理档案
17.其他资料（采购及供应商评价、服务客户和投诉处理、分包档案、不符合工作控制档案等）
如果需要详细全套资料，可以联系我

Ⅶ 微生物问题,请教一下

对青霉素有抗性就是抗Amp
1.设定不同浓度梯度的Amp，与你需要的培养基混合均匀，倒平板（Amp是不能内高温高压灭容菌的，也不能用紫外灭菌，只能用过滤除菌的哦，记住，如果不是就失效了）
2.将你要分离目的细菌的混合液取少量，在上述平板上用涂布器涂布均匀，合适温度培养。
3.选取能长出少量单菌落的平板，记得那个平板的Amp浓度
4.用接种环挑取单菌落，在该Amp浓度的平板上画线分离，还要进行镜检，确定是一种还是多种这样的细菌。则可以分离到你想要的细菌了。
注意：每个浓度的Amp平板要做多个平衡。

Ⅷ 您好 能给我也发一份微生物实验室的设备清单么 我们单位打算设微生物实验室

一、无菌室和超净工作台

是实验室的核心部分，主要为样品提供保护，保证实验结果的准确和人员的安全。
（一）无菌室
无菌室通过空气的净化和空间的消毒为微生物实验提供一个相对无菌的工作环境。无菌室的主要组成设备的空气自净器，传递窗，紫外线灯等。严格的无菌室可能还装备风彬室等。
（二）超净工作台
超净工作台作为代替无菌室的一种设备，使用简单方便，为实验的开展提供一个相对无菌的操作台。超净工作台湾队根据风向分为水平式和垂直式。
二、培养箱
主要用于实验室微生物的培养，为微生物的生长提供一个适宜的环境。
（一）普通培养箱：一般控制的温度范围为：室温＋5～65度，又分为电热恒温培养箱和隔水式恒温培养箱。
（二）生化培养箱：一般控制的温度范围为：5～50度。
（三）恒温恒湿箱：一般控制的温度范围为：5～50度，控制的湿度范围为：50～90％。可作为霉菌培养箱。
（四）厌氧培养箱：适用于厌氧微生物的培养。
三、电热干燥箱：用于吸管，平皿类玻璃器皿的干热、灭菌和烘烤。
四、高压蒸汽灭菌器（又叫高压灭菌锅）：物品的灭菌。
五、天平：一般要求具备精度达到万分之一的分析天平。
六、显微镜：观察细菌形态和动力、微生物和微小物品结构的必备仪器。
七、分光光度计：在QS中用于生产方便面，茶饮料，肉制品，乳制品，棉白糖的企业。
八、酸度计：在QS中用于生产果蔬罐头，白沙糖，饮用水类的企业。
九、电导率仪和浊度仪:在QS中用于生产饮用水的企业。
十、折光仪:在QS中用于生产果蔬罐头，饮料类的企业。
十一、恒温水温浴锅:在QS中用于部分培养温度需要水浴（如大肠杆菌检验）生产方便面，速冻面米食品企业。
十二、定氮装置:在QS中用于生产乳制品，含蛋白质饮料的企业。
杂质度过滤机:在QS中用于生产乳品企业。
均质器：用于均质样品，有旋转刀片式和拍击式可以选择。

常规玻璃器皿
一、 吸管：用于吸取少量液体，常用的吸管为0.1刻度1mL及1.0刻度的10mL吸管。
二、培养皿：为硬质玻璃双碟，常用于分离培养，盖与底大小应合适，常用规格为90mm。
三、三角烧瓶与广口瓶：多用于盛培养基及配制溶液，常用的规格有250mL、500mL、1000mL。
四、烧杯：供盛液或煮沸用，常用的规格为100mL、250mL、500mL、1000mL
五、量筒：用于液体测量，常用规格为100mL、250mL、1000mL
六、试管：用于细菌培养，有多种规格。
七、载玻片盖玻片：细菌涂片观察用。
八、试剂瓶：装试剂用，常用棕色避光
九、其它，如试管架、毛刷、酒精灯、接种针、接种环等
实验室配套常用设备
一、通风柜
二、离心机
三、纯水器
四、烘箱
五、低温冰箱实验室常用消耗品(净化工作台)
六、其他
（一）实验室耗材（枪头）、振荡器、菌落计数器、电位 pH计、高速离心机、离心管、试管、巴氏吸管、枪头盒、培养皿、细胞培养板、酶标版、过滤器、移液管、接种环、接种针、比色皿、培养板、PCR管、量筒烧杯。
（二）常用设备，如铁架台、升降台、滴定台、镊子、搅拌子、各种刷子、药勺、滤纸、三脚架、支架，等等。

Ⅸ 微生物检测应注意什么事项

微生物检测应注意什么事项
微生物检验无菌操作的注意事项有很多细节，日常的微生物检验过程中要注意无菌操作，除了要在洁净台和操作器皿上的消毒，还需要注意人员卫生和环境的卫生。

【操作技巧】

进行培养时，动作要准确敏捷，但又不必太快，以防空气流动，增加污染机会。不能用手触及已消毒器皿，如已接触，要用火焰烧灼消毒或取备品更换。为拿取方便，工作台面上的用品要有合理的布局，原则上应是右手使用的东西放置在右侧，左手用品在左侧，酒精灯置于中央。工作由始至终要保持一定顺序性，组织或细胞在未做处理之前，勿过早暴露在空气中。同样，培养液在未用前，不要过早开瓶;用过之后如不再重复使用，应立即封闭瓶口直立可增加落菌机会。吸取营养液、PBS、细胞悬液及其它各种用液时，均应分别使用吸管，不能混用，以防扩大污染或导致细胞交叉污染。工作中不能面向操作野讲话或咳嗽，以免唾沫把细菌或支原体带入工作台面发生污染。操作前用酒精擦拭超净台面及双手。手或相对较脏的物品不能经过开放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液时如吸管尖碰到瓶口，则应将吸管丢掉。

【培养前准备】

在开始实验前要制定好实验计划和操作程序。有关数据的计算要事先做好。根据实验要求，准备各种所需器材和物品、清点无误后将其放置操作场所(培养室、超净台)内，然后开始消毒。这可以避免开始实验后.囚物品不全往返拿取而增加污染机会。

【火焰消毒】

在无菌环境进行培养或做其它无菌工作时，首先要点燃酒精灯或煤气灯。以后一切操作，如按装吸管帽、打开或封闭瓶口等，都需在火焰近处并经过烧灼进行。但要注意：金属器械不能在为焰中烧的时间过长，以防退火，烧过的金属镊要待冷却后才能挟取组织，以免造成组织损伤。吸取过营养液后的吸管不能再用火焰烧灼，因残留在吸管头中营养液能烧焦形成炭膜，再用时会把有害物带入营养液中。开启、关闭长有细胞的培养瓶时，火焰灭菌时间要短。防止因温度过高烧死细胞。另外胶塞过火焰时也不能时间长，以免烧焦产生有毒气体，危害培养细胞。

【洗手和着装】

原则上和外科手术相同。平时仅做观察不做培养操作时，可穿装细胞培养室内紫外线照射30min的清洁工作服。在利用超净台工作时，因整个前臂要伸入箱内，应着长袖的清洁工作服，并于开始操作前要用75%酒精消毒手。如果实验过程中手触及可能污染的物品和出入培养室都要重新用消毒液洗手。进入原代培养室需彻底洗手还要戴口罩、着消毒衣帽。

【操作台消毒】

体外培养细胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是决定培养成功或失败的首要条件。即便使用设备完善的实验室。若实验者粗心大意，技术操作不规范,也会导致污染。因而.为在一切操作中为最大可能的保证无菌.每一项工作都必须做到有条不紊和完全靠。无菌培养室每天都要用0.2%的新洁尔灭拖洗地面—次(拖布要专用).紫外线照射消毒30-50min，超净工作台台面每次实验前要用75%酒精擦洗。然后紫外线淌毒30min。在工作台面消毒时切勿将培养细胞和培养用液同时照射紫外线，消毒时工作台面上用品不要过多或重叠放置.否则会遮挡射线降低消毒效果。—些操作用具如移液器、废液缸、污物盒、试管架等用75%酒精擦洗后置于台内同时紫外线消毒。